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一、沙門氏菌生物學特性
生物學特性：沙門氏菌屬是食源性細菌性腸胃炎的首要病原菌，屬于腸桿菌科，革蘭氏陰性無芽孢桿菌，營養(yǎng)需求不高，需氧或兼性厭氧。典型菌株多具有周生鞭毛、能運動（除雞瘟沙門菌和雞沙門菌外）、大部分菌株產(chǎn)H2S、能分解葡萄糖并產(chǎn)氣，最適培養(yǎng)溫度為37℃，最適pH 7.2～7.6。耐受膽鹽，在糞便、土壤、食品、水中可生存5個月至二年之久。
血清型：沙門菌屬由兩個種組成：腸道沙門菌（S.enterica）和邦哥沙門氏菌（S.bongori）。目前已知沙門氏菌血清型有2500多種，
流行學特征：引起食物中毒最常見的沙門氏菌包括鼠傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌。而易引起沙門氏菌中毒的食品則有肉、蛋、乳類等。
二、沙門氏菌的檢驗
三、培養(yǎng)基原理解析
1. 緩沖蛋白胨水（BPW）
?其成分中含有磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉，起緩沖液的作用；
?蛋白胨提供生長營養(yǎng)，有利于損傷沙門氏菌的復蘇。
2. 四硫磺酸鈉煌綠增菌液（TTB）
?配方中硫代硫酸鈉和碘經(jīng)氧化生成四硫磺酸鈉，它對大腸菌群有抑制作用，對沙門氏菌無影響（因沙門氏菌具有四硫磺酸酶，能分解四硫磺酸鈉，而大腸菌群沒有這種酶，故生長受抑制）；
?碳酸鈣為緩沖劑，可使沙門氏菌不致因酸堿度改變面死亡。
?由于配方含碳酸鈣，因此，該培養(yǎng)基配置后的最終pH不在7.0±0.2，而是偏堿性。
四硫磺酸鈉煌綠增菌液（TTB）
3. 亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）
?蛋白胨提供碳源和氮源滿足細菌生長的需求；乳糖是可發(fā)酵的糖類；亞硒酸氫鈉抑制革蘭氏陽性菌和非沙門氏菌的大多數(shù)革蘭氏陰性腸道菌；磷酸鹽是緩沖劑；L-胱氨酸為還原劑。
?使用過程中要注意SC培養(yǎng)基不穩(wěn)定，配置時避免過度加熱。
亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）
4. 亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基（BS）
?配方中亞硫酸鈉可與檸檬酸鉍銨生成亞硫酸鉍，抑制革蘭氏陽性菌和大腸菌群；硫酸亞鐵可產(chǎn)生硫化氫，并與鐵反應生成黑色沉淀。
?沙門氏菌在BS上的典型菌落特征：具有金屬光澤的棕色或黑色菌落。但有些菌株形成非典型菌落特征：灰綠色的菌落，周圍培養(yǎng)基不變。
?BS平板應制備后避光常溫保存，并在24h內(nèi)使用。
亞硫酸鉍瓊脂（BS）菌落特征
5. HE瓊脂培養(yǎng)基
?配方中膽鹽、去氧膽酸鈉、溴麝香草酚蘭等成分可抑制革蘭氏陽性菌生長；酸性復紅作為酸堿指示劑的同時，也可抑制陽性菌，但對陰性腸道菌無抑制作用，選擇性較弱。硫代硫酸鈉可被細菌還原產(chǎn)生硫化氫，與檸檬酸鐵銨反應生成黑色硫化亞鐵。
?菌落特征：藍綠色或藍色，多數(shù)菌落中心黑色或全幾乎全黑色；有些菌株為黃色，中心黑色或幾乎全黑色。
HE瓊脂菌落特征——鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028
6. XLD瓊脂培養(yǎng)基
?配方中木糖、乳糖和蔗糖成分作為可發(fā)酵的碳源，除志賀氏菌外，其他大多數(shù)腸桿菌均能發(fā)酵木糖；沙門氏菌發(fā)酵木糖產(chǎn)酸，形成酸性環(huán)境有利于產(chǎn)生脫羧酶使賴氨酸脫羧，從而使培養(yǎng)基的pH值升高向堿性轉(zhuǎn)變；在堿性條件下，硫代硫酸鈉及檸 檬酸鐵銨成分與沙門氏菌產(chǎn)生的硫化氫反應是的菌落的顏色呈黑色；去氧膽酸鹽成分可抑制革蘭氏陽性菌的生長。
?菌落特征：菌落呈粉紅色,帶或不帶黑色中心,有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心,或呈現(xiàn)全部黑色的菌落；有些菌株為黃色菌落,帶或不帶黑色中心。
XLD瓊脂菌落特征——鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028
?蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化鈉可維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑;膽鹽抑制革蘭氏陽性菌;選擇性添加劑增強培養(yǎng)基的抑制雜菌的能力;混合色素分別與沙門氏菌和大腸菌群所對應的酶發(fā)生特異性反應，水解底物，釋放出顯色基團，在淡黃色平板上沙門氏菌產(chǎn)生品紅色的菌落，大腸菌群產(chǎn)生藍綠色的菌落。
CRM004 沙門顯色培養(yǎng)基——鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028
?蛋白胨、牛肉膏粉提供氮源、維生素、礦物質(zhì);乳糖、葡萄糖、蔗糖為可發(fā)酵糖類，其產(chǎn)酸時通過酚紅指示劑測出，酸性呈黃色，堿性呈紅色;硫代硫酸鈉可被某些細菌還原為硫化氫，與硫酸亞鐵銨中的鐵鹽生成黑色硫化鐵;氯化鈉維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。
三鐵塘
9. 賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基
?具有氨基酸脫羧酶的細菌，能分解氨基酸使其脫羧生成胺（賴氨酸→尸胺）和二氧化碳，使培養(yǎng)基變堿，使指示劑顯示出來。
?結(jié)果判讀：陽性為試驗管為綠色-藍綠色，對照管變黃色； 陰性為試驗管和對照管均變黃色，或均不變色。
賴氨酸脫羧酶試驗陽性
10. 靛基質(zhì)試驗
?某些細菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用顯色反應表現(xiàn)出來。吲哚與對二甲基氨基苯醛結(jié)合，形成玫瑰吲哚，為紅色化合物。
?結(jié)果判讀：陽性為滴加靛基質(zhì)試劑后液面立即變玫紅色；陰性為滴加試劑后不變紅色。
靛基質(zhì)試驗
11. 尿素酶試驗
?具有尿素酶的細菌分解培養(yǎng)基中的尿素，產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)呈堿性，酚紅指示劑在pH6.8時呈黃色，pH8.1呈粉紅色。
?結(jié)果判讀：陽性為玫紅色； 陰性為淡橙紅色-淡黃色。
尿素酶試驗
12. 氰化鉀利用試驗
?氰化鉀是細菌呼吸酶系統(tǒng)的抑制劑,可與呼吸酶作用使酶失去活性,抑制細菌的生長,但有的細菌在一定濃度的氰化鉀存在時仍能生長,以此鑒別細菌.。
?結(jié)果判讀：陽性為試驗管和對照管都有生長變渾濁； 陰性為試驗管澄清不見生長，對照管生長渾濁。
氰化鉀利用陰性結(jié)果
13. 糖（醇）發(fā)酵試驗
?絕大多數(shù)細菌都能利用糖（醇）類作為碳源和能源，但是它們在分解糖（醇）的能力上有很大的差異，有些細菌能分解某種糖（醇）并產(chǎn)酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和氣體（如氫、甲烷、二氧化碳等）；有些細菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。酸的產(chǎn)生可利用指示劑來斷定。
?（指示劑為溴甲酚紫）結(jié)果判讀：陽性為變黃色；陰性為紫色。
甘露醇發(fā)酵試驗
14. 沙門氏菌屬不同生化反應結(jié)果出現(xiàn)百分率
實驗名稱 | 反應結(jié)果 | 沙門菌比例（%） |
三糖鐵發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸 | 陽性 | 100 |
三糖鐵發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)氣 | 陽性 | 91.93 |
三糖鐵發(fā)酵乳糖 | 陰性 | 99.24 |
三糖鐵發(fā)酵蔗糖 | 陰性 | 99.5 |
三糖鐵產(chǎn)硫化氫 | 陽性 | 91.6 |
尿素（pH7.2） | 陰性 | 99 |
賴氨酸脫羧酶 | 陽性 | 94.65 |
ONPG | 陰性 | 98.44 |
VP | 陰性 | 100 |
靛基質(zhì)試驗 | 陰性 | 98.9 |
15. 沙門氏菌判定表
三糖鐵 | 賴氨酸脫羧酶 | 靛基質(zhì) | 尿素（pH7.2） | 補充實驗 | O與H多價 | 結(jié)果判定 | ||
斜面 | 底層 | 硫化氫 | ||||||
紅色 | 黃色 | 產(chǎn) | 陽性 | 陰性 | 陰性 | 無需補充 | 均凝集 | 沙門氏菌屬 |
紅色 | 黃色 | 不產(chǎn) | 陽性 | 陰性 | 陰性 | ONPG陰性 | 均凝集 | 沙門氏菌屬 |
黃色 | 黃色 | 產(chǎn) | 陽性 | 陰性 | 陰性 | 無需補充 | 均凝集 | 沙門氏菌屬 |
黃色 | 黃色 | 不產(chǎn) | 陰性 | 無需測試 | 無需測試 | 無需補充 | 無需測試 | 非沙門氏菌 |
紅色 | 紅色 | 產(chǎn)/不產(chǎn) | 陽性/陰性 | 無需測試 | 無需測試 | 無需補充 | 無需測試 | 非沙門氏菌 |
?在接種三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基的同時,可直接接種蛋白胨水（供做靛基質(zhì)試驗）、尿素瓊脂（pH7.2）、氰化鉀（KCN）培養(yǎng)基，一定要注意是同一個菌落，這種實驗組合的優(yōu)勢是可篩選掉更多的非沙門氏菌，減少后續(xù)工作量。
?上述結(jié)果判定僅適用于典型沙門氏菌，如出現(xiàn)非典型結(jié)果，應進行系統(tǒng)生化鑒定和血清學分型進行確認。
16. 071740 沙門氏菌生化鑒定盒（接種鼠傷寒沙門氏菌的結(jié)果）
17. EasyID 沙門氏菌生化鑒定盒（接種鼠傷寒沙門氏菌的結(jié)果）
四、血清試驗
血清學鑒定中的多價菌體（Ｏ）和多價鞭毛抗原鑒定是沙門氏菌鑒定的必做項目，血清學分型為選作試驗。實驗室必須配備沙門氏菌的多價菌體（Ｏ）和多價鞭毛（Ｈ）診斷血清。血清學試驗必須基于生化結(jié)果試驗的結(jié)果，不能單純以血清學實驗結(jié)果來報告最終。
A-F “O”多價血清凝集 A-F “O”多價血清不凝集
五、沙門氏菌恒溫熒光核酸快速檢測
六、沙門氏菌檢驗所需培養(yǎng)基試劑
用途 | 貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
前增菌 | 023130 | 緩沖蛋白胨水（BPW） | 瓶（干粉）250g |
CP0680 | 緩沖蛋白胨水（BPW） | 盒（袋裝）225 mL×10袋 | |
CP0290 | 緩沖蛋白胨水（BPW） | 盒（瓶裝）225 mL×6瓶 | |
CP0560A | 緩沖蛋白胨水（BPW） | 盒（管裝）9 mL×20支 | |
023130P1 | 緩沖蛋白胨水（BPW） | 瓶（顆粒）250 g | |
二次增菌 | 023030 | 四硫磺酸鈉煌綠增菌液基礎（TTB） | 瓶（干粉）250g |
SR0040 | 四硫磺酸鈉煌綠增菌液配套試劑 | 盒（西林瓶）2×5支/盒 | |
CP0300 | 四硫磺酸鈉煌綠增菌液（TTB） | 盒（管裝）10 mL×20支 | |
023040 | 亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC） | 瓶（干粉）250g | |
CP0050 | 亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC） | 盒（管裝）10 mL×20支 | |
023040P1 | 亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC) | 瓶（干粉）250g | |
平板分離 | 023052 | 亞硫酸鉍瓊脂（BS） | 瓶（干粉）250g |
023070 | HE瓊脂培養(yǎng)基 | 瓶（干粉）250g | |
CP0110 | HE瓊脂培養(yǎng)基 | 盒（平板）90 mm×20 | |
029999 | 木糖-賴氨酸-去氧膽酸鹽瓊脂（XLD | 瓶（干粉）250g | |
029999P1 | 木糖-賴氨酸-去氧膽酸鹽瓊脂（XLD） | 瓶（顆粒）250 g | |
CP0180 | 木糖-賴氨酸-去氧膽酸鹽瓊脂（XLD） | 盒（平板）90 mm×20 | |
CRM004 | 沙門氏菌顯色培養(yǎng)基 | 1000 mL | |
CP0560 | 沙門氏菌顯色培養(yǎng)基平板 | 盒（平板）90 mm×20 | |
生化鑒定 | 022080 | 三糖鐵瓊脂（TSI） | 瓶（干粉）250g |
CP0080 | 三糖鐵斜面 | 盒（管裝）20支 | |
022110 | 蛋白胨水 | 瓶（干粉）100g | |
075240 | 蛋白胨水 | 盒（西林瓶）20支 | |
029230 | 靛基質(zhì)試劑 | 10 mL×1支/盒 | |
023090 | 尿素瓊脂培養(yǎng)基基礎 | 瓶（干粉）100g | |
029100 | 40%無菌尿素溶液 | 盒（西林瓶）2 mL×10支 | |
075150 | 尿素（凍干） | 10支（凍干）+10支（無菌水） | |
075330 | 氰化鉀生長實驗管 | 盒（西林瓶）20支 | |
075340 | 氰化鉀對照管 | 盒（西林瓶）20支 | |
生化鑒定 | 075280 | 賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基 | 盒（西林瓶）20支 |
075290 | 氨基酸脫羧酶對照培養(yǎng)基 | 盒（西林瓶）20支 | |
029110 | 無菌石蠟油 | 10 mL×1支 | |
075090 | 山梨醇 | 盒（西林瓶）20支 | |
075040 | 甘露醇 | 盒（西林瓶）20支 | |
075180 | β-半乳糖苷ONPG | 盒（西林瓶）20支 | |
075100 | 衛(wèi)矛醇 | 盒（西林瓶）20支 | |
075140 | 水楊素（水楊苷） | 盒（西林瓶）20支 | |
075190 | 丙二酸鹽 | 盒（西林瓶）20支 | |
HKI 02 | Easy ID沙門氏菌生化鑒定盒（不含三糖鐵） | ||
血清學實驗驗 | HM42 | 沙門氏菌乳膠凝集試劑盒 | 50 tests |
026050 | 半固體瓊脂 | 瓶（干粉）250g | |
075350A | 半固體瓊脂 | 盒（管裝）20支 | |
023118 | 沙門氏菌鞭毛誘導軟瓊脂 | 瓶（干粉）250g | |
核酸快速檢測試劑盒 | KJD05L | 沙門氏菌核酸檢測試劑盒(恒溫熒光法) | 24測試/盒 |
HANDY PALTE微生物測試片 | HP005 | 沙門氏菌檢測片 | 20片/包 |
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