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唐菖蒲伯克霍爾德氏菌（椰毒假單胞菌酵米面亞種）檢驗(yàn)解決方案

發(fā)布時(shí)間：2020-09-10      瀏覽次數(shù)：12678    分享：

       今年8月，廣東省一家腸粉店發(fā)生食物中毒，11名顧客吃了店內(nèi)河粉后，出現(xiàn)嘔吐、腹瀉等癥狀，送醫(yī)后1人搶救無(wú)效去世，2人病情較重，其余人員暫無(wú)生命危險(xiǎn)。

       經(jīng)調(diào)查，這起食物中毒的罪魁禍?zhǔn)资恰耙炯賳伟?，中毒原因是因?yàn)槟承┚昕梢援a(chǎn)生一種叫“米酵菌酸”的毒素，一旦吃了含有這種毒素的食物，就會(huì)表現(xiàn)為惡心、嘔吐、腹瀉、頭暈、全身無(wú)力，嚴(yán)重時(shí)會(huì)出現(xiàn)黃疸、肝腫大、皮下出血、嘔血、驚厥抽搐等癥狀，最嚴(yán)重的會(huì)出現(xiàn)休克甚至死亡。

       “椰毒假單胞菌”，全稱(chēng)椰毒假單胞酵米面亞種Pseudomonas cocovenenans subsp. Farinofermentans，是一種存在于酵米面、變質(zhì)鮮銀耳及其他淀粉類(lèi)發(fā)酵產(chǎn)品中的食源性致病菌，

       由于椰毒假單胞酵母菌酵米面亞種不是國(guó)際公開(kāi)發(fā)表和承認(rèn)的細(xì)菌分類(lèi)科學(xué)名稱(chēng)，1999年劃分為唐菖蒲伯克霍爾德氏菌Burkholderia gladioli的一個(gè)病原型，目前現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)GB/T 4789.29-2003《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 椰毒假單胞菌酵米面亞種檢驗(yàn)》。2018年9月國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)發(fā)布的《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 唐菖蒲伯克霍爾德氏菌（椰毒假單胞菌酵米面亞種）檢驗(yàn)（征求意見(jiàn)稿）》中，將該菌進(jìn)行更名，同時(shí)新增分離培養(yǎng)基mPDA同PCFA用于唐菖蒲伯克霍爾德氏菌（椰毒假單胞菌酵米面亞種）的分離。

具體檢驗(yàn)流程如下：

1. 檢驗(yàn)流程（前增菌以及選擇性分離過(guò)程）



2. 檢驗(yàn)流程初篩實(shí)驗(yàn)

      自選擇性瓊脂平板上分別挑取5個(gè)以上典型或可疑菌落，分區(qū)劃線(xiàn)卵黃瓊脂平板，36℃±1℃培養(yǎng)。挑取培養(yǎng)18～24 h的菌落進(jìn)行革蘭氏染色及氧化酶試驗(yàn)。對(duì)于革蘭氏染色陰性、氧化酶試驗(yàn)陰性的菌繼續(xù)培養(yǎng)至48 h±2 h，對(duì)于卵磷脂酶陽(yáng)性，帶有虹彩環(huán)的單個(gè)菌落，接種PDA平板，36℃±1℃培養(yǎng)24 h±2 h。


（環(huán)凱貨號(hào)027162）卵黃瓊脂（卵磷脂酶試驗(yàn)）

唐菖蒲伯克霍爾德氏菌恒溫?zé)晒鈹U(kuò)增試劑盒快速檢測(cè)法

1. 技術(shù)原理：利用兩對(duì)特殊引物和具有鏈置換活性的BstDNA聚合酶，使模板兩端引物結(jié)合處循環(huán)出現(xiàn)環(huán)狀單鏈結(jié)構(gòu)，引物順利與模板結(jié)合并進(jìn)行鏈置換擴(kuò)增反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)在恒溫條件下（60~65℃）進(jìn)行連續(xù)快速擴(kuò)增。反應(yīng)加入顯色指示劑，陰陽(yáng)性結(jié)果顯色差異顯著，可直接通過(guò)顏色變化判讀結(jié)果。

2. 產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

操作簡(jiǎn)便：簡(jiǎn)單加樣操作，快速上手；

快速省時(shí)：獲得菌液后1 h完成檢測(cè)

靈敏度高：最低檢測(cè)限8CFU。

特異性強(qiáng)：利用靶基因序列上的多個(gè)獨(dú)立區(qū)域設(shè)計(jì)多條引物，保證擴(kuò)增反應(yīng)的高度特異性

結(jié)果簡(jiǎn)單可視：肉眼觀(guān)察顏色，可判斷結(jié)果。

“+”代表陽(yáng)性；“-”代表陰性

3. 產(chǎn)品組分：

組分名稱(chēng)

規(guī)格×數(shù)量

唐菖蒲伯克霍爾德氏菌檢測(cè)試劑（凍干）

3排× 8管

復(fù)溶液

650 μL × 1管

陽(yáng)性對(duì)照（凍干）

1管

陰性對(duì)照（凍干）

1管

裂解液

1 mL × 1管

顯色指示劑

80 μL×1管

超純水

1 mL×1管

說(shuō)明書(shū)

1份

4. 過(guò)程圖解：

5. 產(chǎn)品結(jié)果

“+”代表陽(yáng)性；“-”代表陰性

相關(guān)產(chǎn)品信息

用途

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱(chēng)

包裝規(guī)格

快速檢驗(yàn)和鑒定

KJD16L

唐菖蒲伯克霍爾德氏菌核酸快速檢測(cè)試劑盒

核酸快速檢測(cè)試劑盒

24測(cè)試/盒

選擇性增菌

021055

GVC增菌液

250g/瓶

分離培養(yǎng)

021054

改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（mPDA）

250g/瓶

021059

PCFA培養(yǎng)基基礎(chǔ)

250g/瓶

SR0690

PCFA培養(yǎng)基配套試劑

10支/盒

卵磷脂酶試驗(yàn)

027161

卵黃瓊脂基礎(chǔ)（適應(yīng)GB4789.29-2003）

250g/瓶

卵磷脂酶試驗(yàn)

027162

卵黃瓊脂基礎(chǔ)（適應(yīng)GB4789.29修訂意見(jiàn)稿）

250g/瓶

純培養(yǎng)

021057

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基

250g/瓶

形態(tài)觀(guān)察

029010

革蘭氏染色液

4種×10mL/盒

氧化酶試驗(yàn)

029172

氧化酶試劑

50測(cè)試/盒

動(dòng)力試驗(yàn)和產(chǎn)毒素試驗(yàn)

021056

馬鈴薯葡萄糖半固體瓊脂

250g/瓶


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