GB4789.8-2016 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)及其注意事項(xiàng)-環(huán)凱微生物官網(wǎng)

更新 | GB4789.8-2016 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)及其注意事項(xiàng)

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小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的生物學(xué)特性

生物學(xué)特性：小腸結(jié)腸炎耶爾森菌革蘭氏染色陰性，菌體呈球桿狀，不形成芽孢，22℃~30℃培養(yǎng)時(shí)周身可形成豐富鞭毛，需氧厭氧條件均可生長，生長范圍溫度0℃~45℃，最佳生長溫度為26℃。

流行學(xué)特征：是一種人獸共患病原菌，廣泛分布于自然界中，在海產(chǎn)品、蛋類、鮮奶、飲料、速凍食品中可分離到該菌，是冰箱中存放食物的重要污染菌，被稱為“冰箱菌”；主要通過人畜接觸和糞口途徑傳播，感染后主要癥狀為腹瀉、腸炎等，還能引起呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、骨骼、結(jié)締組織和其他一些全身性疾病癥狀。

小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的檢驗(yàn)

增菌
? 以無菌操作取25g(或25mL)樣品放入含有225mL改良磷酸鹽緩沖液增菌液的無菌均質(zhì)杯或均質(zhì)袋內(nèi)，以8000r/min均質(zhì)1min或拍擊式均質(zhì)器均質(zhì)1min。
? 液體樣品或粉末狀樣品，應(yīng)振蕩混勻。均質(zhì)后于26℃1℃增菌48h~72h。增菌時(shí)間長短可根據(jù)對樣品污染程度的估計(jì)來確定。

堿處理
? 除乳與乳制品外，其他食品的增菌液0.5mL與堿處理液4.5mL充分混合15s。

分離培養(yǎng)
? 將乳與乳制品增菌液或經(jīng)過堿處理的其他食品增菌液分別接種于CIN-1瓊脂平板和改良Y瓊脂平板，26℃±1℃培養(yǎng)48h±2h 。
? 注意事項(xiàng)：在CIN-1瓊脂平板和改良Y瓊脂平板上劃線分離時(shí)，應(yīng)三區(qū)劃線，且線條稀疏不宜過密，以免雜菌生長過大，掩蓋可疑小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的檢出；

培養(yǎng)基原理解析

1、改良磷酸鹽緩沖液

? 山梨醇提供碳氮源，磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉為緩沖液，膽鹽抑制革蘭氏陽性菌，氯化鈉提供細(xì)胞所需要的滲透壓。

2、CIN-1瓊脂
? 胰胨和酵母浸膏提供氮源和微量元素；甘露醇為可發(fā)酵糖；去氧膽酸鈉和結(jié)晶紫抑制革蘭氏陽性菌；中性紅是pH指示劑；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。。
? 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌菌落為深紅色中心，周圍具有無色透明圈（紅色牛眼狀菌落），菌落大小為1-2mm。

小腸結(jié)腸炎耶爾森菌菌落深紅色，周圍具有無色透明圈（紅色牛眼狀菌落）

3、改良Y瓊脂
? 蛋白胨和水解酪蛋白提供氮源和微量元素；乳糖用于糖發(fā)酵試驗(yàn)；氯化鈉維持正常的滲透壓，去氧膽酸鈉和三號膽鹽抑制革蘭氏陽性菌；丙酮酸鈉刺激目標(biāo)菌的生長；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。
? 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌菌落為無色透明、不黏稠菌落。

小腸結(jié)腸炎耶爾森菌無色透明，不粘稠。

CRM017 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌在顯色培養(yǎng)基上菌落特征

致病性小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌→淡紫色	非致病性小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌和（枸櫞酸桿菌屬、腸桿菌屬、氣單胞菌屬等菌）→金屬藍(lán)色，在金屬藍(lán)色菌中生長被抑制或限制

小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌生化鑒定原理解析

1、改良克氏雙糖試驗(yàn)

? 操作方法：分別挑取可疑菌落3個(gè)~5個(gè)，分別接種于改良克氏雙糖瓊脂，接種時(shí)先在斜面劃線，再于底層穿刺，26℃±1℃培養(yǎng)24h 。

? 改良克氏雙糖瓊脂：蛋白胨、酵母浸膏、牛肉膏提供氮源、維生素、礦物質(zhì)；山梨醇、葡萄糖提供可發(fā)酵糖類；硫代硫酸鈉可被某些細(xì)菌還原成H2S，與鐵離子生成黑色硫化鐵；酚紅是pH指示劑，發(fā)酵糖產(chǎn)酸變黃，產(chǎn)堿變紅；氯化鈉維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。


小腸結(jié)腸炎耶爾森菌在改良克氏雙糖瓊脂上的特征	大腸埃希氏菌在改良克氏雙糖瓊脂上的特征

? 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌在改良克氏雙糖瓊脂上的特征斜面底層變黃不產(chǎn)氣。

? 注意事項(xiàng)：先在斜面劃線，再與底層穿刺。由于培養(yǎng)36~48h后小腸結(jié)腸炎耶爾森菌會產(chǎn)堿，造成斜面變紅，因此應(yīng)注意培養(yǎng)時(shí)效，在培養(yǎng)24h時(shí)觀察結(jié)果；

2、尿素酶實(shí)驗(yàn)

? 操作方法：用接種環(huán)挑取一滿環(huán)可疑培養(yǎng)物，接種到尿素培養(yǎng)基，接種量要足夠大，26℃±1℃培養(yǎng)2h~4h，若陽性不明顯，則繼續(xù)培養(yǎng)到24h后再觀察。

? 尿素酶試驗(yàn)原理：具有尿素酶的細(xì)菌分解培養(yǎng)基中的尿素，產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)呈堿性，酚紅指示劑在pH6.8時(shí)呈黃色，pH8.1呈粉紅色。

尿素酶實(shí)驗(yàn)

? 結(jié)果判讀：陽性為玫紅色；陰性為淡橙紅色-淡黃色。

? 注意事項(xiàng)：接種量足夠大。

3、動力實(shí)驗(yàn)

? 操作方法：將尿素酶試驗(yàn)陽性菌落分別接種于兩管半固體培養(yǎng)基中，于26℃±1℃和36℃±1℃培養(yǎng)24h。

? 動力觀察原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、維生素、礦物質(zhì)；氯化鈉維持均衡的滲透壓；較少量的瓊脂作為培養(yǎng)基的凝固劑。

動力實(shí)驗(yàn)

? 結(jié)果判讀：測試菌有動力的話，就會沿穿刺線擴(kuò)散生長，無動力就不會擴(kuò)散生長。

? 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌26℃±1℃溫度下有動力，擴(kuò)散生長； 36℃±1℃溫度下沒動力，不擴(kuò)散沿穿刺線生長；

4、革蘭氏染色鏡檢

? 操作方法：將在26℃有動力而36℃無動力的可疑菌培養(yǎng)物劃線接種營養(yǎng)瓊脂平板,進(jìn)行純化培養(yǎng)，用純化物進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢和生化試驗(yàn)。

? 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌呈革蘭氏陰性球桿菌,有時(shí)呈橢圓或桿狀,大小為(0.8μm~3.0μm)×0.8μm

小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌與其他相似菌的生化鑒別表

其他相似菌生化鑒定

1、糖（醇）發(fā)酵試驗(yàn)

? 絕大多數(shù)細(xì)菌都能利用糖（醇）類作為碳源和能源，但是它們在分解糖（醇）的能力上有很大的差異，有些細(xì)菌能分解某種糖（醇）并產(chǎn)酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和氣體（如氫、甲烷、二氧化碳等）；有些細(xì)菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。酸的產(chǎn)生可利用指示劑來斷定。

? （指示劑為溴甲酚紫）結(jié)果判讀：陽性為變黃色；陰性為紫色。