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金葡標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法常見(jiàn)的難點(diǎn)

發(fā)布時(shí)間:2024-11-20    瀏覽次數(shù):1599

來(lái)源:環(huán)凱轉(zhuǎn)載于“ 六扇門(mén)Study”公眾號(hào),作者~SIXDoors

前段時(shí)刻,某專(zhuān)業(yè)群有老師發(fā)了一張BP平板圖

“哇,好漂亮的涂布板”

(圖片來(lái)自網(wǎng)友分享)

由此引發(fā)了大家對(duì)金葡標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法的討論

1、怎么操作才能涂布出這么漂亮的板?

2、GB4789.10-2016版標(biāo)準(zhǔn)對(duì)金葡典型和可疑菌落的表述不清晰,新標(biāo)準(zhǔn)會(huì)如何修改?

BP板涂布操作技巧寶典

1


選擇合適的稀釋梯度,這個(gè)很關(guān)鍵,如果稀釋梯度不夠,菌落密集疊加,很難分開(kāi),上圖如果菌落再少一半,就更完美了。

2


平板里傾注的BP培養(yǎng)基不能太薄,4mm較好。

3


使用微量移液槍將樣品轉(zhuǎn)移到平板上,控制樣品的流量,使其不會(huì)濺出平板。

4


涂布時(shí)最好使用翹起頂端L棒,涂布更均勻。標(biāo)準(zhǔn)中要求涂布0.3,0.3,0.4,盡量不要涂0.4,平均成0.3,0.35,0.35,分布相對(duì)更平均一點(diǎn),也更容易吸收。

5


涂布時(shí)盡量涂干,如果涂布后,液體吸收不好,可以放在潔凈工作臺(tái)上,繼續(xù)吹五分鐘就可以了。

6


冷藏過(guò)的平板需要恢復(fù)到室溫后再使用,同時(shí)注意平板表面不能有冷凝水,免得影響涂布效果。最好一個(gè)一個(gè)培養(yǎng)皿攤開(kāi),恢復(fù)室溫會(huì)比較快,否則疊放在一起,中間的平板可能會(huì)沒(méi)有恢復(fù)到室溫。

典型和可疑菌落的表述很重要

上圖是2016版標(biāo)準(zhǔn)對(duì)BP平板上金黃色葡萄球菌典型菌落的描述,大家看看懵圈不?

首先,8.4.1對(duì)菌落的描述,這是典型菌落?還是可疑菌落?

描述的有“不透明沉淀環(huán)和清晰帶”的算,沒(méi)有的也算,到底啥樣的算?

還是前半部分描述的是典型菌落,后半部分是可疑菌落?


其次,8.4.2先選擇了典型菌落,然后8.4.3再?gòu)牡湫途淅镞x擇可疑菌落,誰(shuí)告訴小六,到底怎么選?

結(jié)果計(jì)算的要求又是計(jì)算典型菌落,“可疑菌落”選出來(lái)是干啥用的?

8.4.2還說(shuō)3個(gè)平板所有菌落數(shù)合計(jì)在20CFU~200CFU 之間的平板,計(jì)數(shù)典型菌落數(shù);

第九章又說(shuō)“典型菌落數(shù)在20CFU~200CFU 之間”,這前后表達(dá)也不一致?。?/p>

 

典型和可疑菌落的表述很重要,與后面計(jì)數(shù)和確認(rèn)時(shí)挑取菌落的選擇原則有密切關(guān)系。

坊間傳聞,GB4789.10啟動(dòng)修訂

標(biāo)準(zhǔn)會(huì)修改Baird-Parker 平板菌落形態(tài)描述,提高標(biāo)準(zhǔn)適用性。建議增加一些典型圖例,方便大家理解。


此外,新標(biāo)準(zhǔn)還計(jì)劃修改以下內(nèi)容:

(1)第一法定性檢測(cè),增加金黃色葡萄球菌顯色平板法;

(2)第二法定量檢測(cè),增加“金黃色葡萄球菌測(cè)試片”初篩方法,提高檢測(cè)效率,據(jù)說(shuō)已經(jīng)完成實(shí)驗(yàn)室內(nèi)驗(yàn)證;

(3) 附錄 B 增加金葡總腸毒素檢測(cè),優(yōu)化腸毒素提取流程,據(jù)說(shuō)是酶聯(lián)免疫方法,可采用試劑盒或全自動(dòng)酶聯(lián)免疫設(shè)備進(jìn)行檢測(cè),現(xiàn)在還在驗(yàn)證階段;

(4)標(biāo)準(zhǔn)中增加“質(zhì)控菌株”。

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