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FZ008BF2 副溶血性弧菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48test

英文名稱:Rapid Detection Kit for Vibrio parahaemolyticus (Fluorescent Probe Assays)

貨 號(hào) :FZ008BF2

規(guī) 格 :48測(cè)試/盒

用途:用于食品中副溶血性弧菌的定性檢測(cè)

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產(chǎn)品名稱:副溶血性弧菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)
英文名稱:Rapid Detection Kit for Vibrio parahaemolyticus (Fluorescent Probe Assays)

產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格:

編號(hào) 規(guī)格
FZ008BF248 測(cè)試/盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:本試劑盒僅適用于食品中副溶血性弧菌的定性檢測(cè),其他試驗(yàn)需另按照國標(biāo)《GB4789.7-2013食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 副溶血性弧菌檢驗(yàn)》開展。

檢測(cè)原理:基于Real Time PCR技術(shù),利用針對(duì)于副溶血性弧菌特異性基因的引物、熒光探針以及其他反應(yīng)所需試劑,加入待檢樣品即可進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。在發(fā)生擴(kuò)增過程中,熒光探針與目的基因片段結(jié)合,可被Taq酶分解并產(chǎn)生熒光信號(hào),此時(shí)熒光定量PCR儀可識(shí)別該熒光信號(hào),同時(shí)根據(jù)其強(qiáng)弱變化繪制出相應(yīng)的實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線,進(jìn)而判定副溶血性弧菌是否檢出。

副溶血性弧菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)產(chǎn)品組分:

副溶血性弧菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)產(chǎn)品組分

儲(chǔ)存條件與保質(zhì)期:-20℃避光儲(chǔ)存,有效期為12個(gè)月,避免反復(fù)凍融。

靈敏度:最低檢驗(yàn)限達(dá)到100 CFU/Test

所需其他材料和適用儀器:熒光定量PCR儀(具有能夠檢測(cè)FAM標(biāo)記的熒光通道)、高速離心機(jī)、移液器、移液槍頭及離心管等。

副溶血性弧菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)使用指南:

1,樣品前處理

   1) 樣品增菌液模板 DNA 的制備:
         a) 取25 g(mL)待檢樣品剪碎,置于225 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水中,36 ℃±1 ℃前增菌8~18 h;
         b) 取以上增菌液1 mL到1.5 mL規(guī)格的無菌離心管中,6000 r/min離心5 min,完全去除上清;
         c) 加入30 μL裂解液充分懸浮管底沉淀,輕彈管壁消除氣泡,99℃加熱10 min;
         d) 12000 r/min離心15 min,上清即為待測(cè)樣品DNA,靜置冰上,長(zhǎng)時(shí)間不用應(yīng)再次離心。

   2) 可疑菌落模板 DNA 的制備:挑取可疑菌落,充分懸浮于預(yù)先加有30 μL裂解液的無菌離心管中,后按照上述步驟c)、d)操作。

2, 加樣、反應(yīng)

   1) 按照需求取n個(gè)PCR反應(yīng)管(n=1管陰性對(duì)照+待檢測(cè)樣品數(shù)+1管陽性對(duì)照),從試劑盒中取出預(yù)混液,充分融化,渦旋后短暫離心,以上每管加入20 μL預(yù)混液,待用。
   2) 向上述n個(gè)反應(yīng)管中分別加入陰性對(duì)照、待測(cè)樣品DNA、陽性對(duì)照各5 μL,總反應(yīng)體積為25 μL。蓋緊管蓋,短暫離心,立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
   3) PCR反應(yīng)體系為25 μL,取FAM檢測(cè)通道,在反應(yīng)階段2中60℃時(shí)收集熒光信號(hào),具體程序如下:

反應(yīng)階段 溫度 時(shí)間 信號(hào)收集 循環(huán)數(shù)
195°C30 sec 1
295°C5 sec } 40
60°C30 sec?
   注:在反應(yīng)階段2中60℃時(shí)收集熒光信號(hào),對(duì)于多通道熒光PCR儀,取熒光素“FAM”為信號(hào)采集通道,淬滅基團(tuán)選擇“None”,染料校正選擇“None”。


3, 結(jié)果:一般情況下,可通過軟件自動(dòng)設(shè)定的基線、閾值等直接讀取檢測(cè)結(jié)果。如需調(diào)整,可根據(jù)所使用儀器的自身情況(如噪聲等)以及選取的不同熒光通道進(jìn)行調(diào)整。

   1) 質(zhì)量控制:陰性對(duì)照未出現(xiàn)明顯的S型擴(kuò)增曲線或Ct值>35,陽性對(duì)照出現(xiàn)S型擴(kuò)增曲線且其Ct值<30。若陰陽性對(duì)照不同時(shí)滿足上述條件,則本次檢測(cè)結(jié)果無效,應(yīng)重新檢測(cè)或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。

   2) 結(jié)果判讀:(根據(jù)反應(yīng)所得Ct值判讀,具體見下表:)

Ct值 結(jié)果判讀
≤35副溶血性弧菌陽性。
35~37建議重新檢測(cè),若結(jié)果Ct≥37,則副溶血性弧菌陰性,反之則為副溶血性弧菌陽性。
≥37副溶血性弧菌陰性。

更多實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒(食源性致病菌檢測(cè)系列) 產(chǎn)品列表:

貨號(hào) 產(chǎn)品名稱 用途
FZ009BF2大腸埃希氏菌O157:H7核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 用于食品中大腸埃希氏菌O157:H7 的檢測(cè)
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