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KJD02P EPEC-STEC-EHEC多重PCR檢測(cè)試劑盒 24test

英文名稱:Multiplex PCR Detection Kit for PEC-STEC-EHEC

貨 號(hào) :KJD02P

規(guī) 格 :24測(cè)試/盒

用途:用于食品中腸道致病菌性大腸埃希氏菌、產(chǎn)志賀毒素大腸埃希氏菌、腸道出血性大腸埃希氏菌的定性檢測(cè)

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產(chǎn)品名稱:EPEC-STEC-EHEC多重PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱:Multiplex PCR Detection Kit for PEC-STEC-EHEC

注:EPEC 表示腸道致病性大腸埃希氏菌(Enteropathogenic Escherichia coli);STEC 表示產(chǎn)志賀毒素大腸埃希氏菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli);EHEC 表示腸道出血性大腸埃希氏菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)。

產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格:

編號(hào) 規(guī)格
KJD02P24 測(cè)試/盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:本試劑盒基于 PCR 技術(shù),并適用于食品中 EPEC、STEC 和 EHEC 的檢測(cè)。

EPEC-STEC-EHEC多重PCR檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理:利用 5對(duì)特異性引物和 PCR反應(yīng)所需其他試劑,如反應(yīng)緩沖液、dNTPs以及Taq DNA聚合酶等,加入待檢核酸樣品,即可進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)。經(jīng)比對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物目標(biāo)條帶組合即可判定所對(duì)應(yīng)的致瀉大腸埃希氏菌類別。

產(chǎn)品特點(diǎn):
      1. 快速簡(jiǎn)便:將酶、引物等反應(yīng)組分混勻后進(jìn)行干粉化處理,增加試劑穩(wěn)定性,使用時(shí)減少溶液配制步驟,更為便捷,整個(gè)檢測(cè)反應(yīng)可在 3 h 內(nèi)完成;
      2. 特異性高:由 GB 4789.6?2016《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)致瀉大腸埃希氏菌檢驗(yàn)》提供的目標(biāo)基因引物,保證擴(kuò)增反應(yīng)的高度特異性;
      3. 判讀簡(jiǎn)單:擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳和紫外儀觀察目標(biāo)條帶即可判別,直觀方便。

儲(chǔ)存條件與保質(zhì)期:2~8℃條件下儲(chǔ)存,有效期為12個(gè)月。

所需其他材料和適用儀器:
      1. PCR 儀器、高速離心機(jī)、電泳儀、水平電泳槽、紫外儀、移液器、移液槍頭及離心管等;
      2. 瓊脂糖、溴化乙錠(EB)或其他核酸染料。

EPEC-STEC-EHEC多重PCR檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品組分:

編號(hào) 組分名稱 規(guī)格 × 數(shù)量
--干粉試劑 EP8管 × 3排
--干粉試劑 ST8管 × 3排
--PCR 復(fù)溶液1mL × 1管
Y02陽(yáng)性對(duì)照1管(凍干型)
--陰性對(duì)照1管(凍干型)
--裂解液1mL × 1管
--超純水1mL × 1管
--6 × Loading buffer240μL × 1管 
 說(shuō)明書1份

EPEC-STEC-EHEC多重PCR檢測(cè)試劑盒使用指南:

1,樣品前處理

   1) 參照 GB 4789.6?2016,使用 1 μL 接種環(huán)刮取營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板或斜面上培養(yǎng)18 h~24h 的菌落,懸浮到含 30 μL 裂解液的無(wú)菌離心管中,充分懸浮菌體,輕彈管壁消除氣泡,99℃加熱 10 min;

   2) 12000 r/min 離心 15 min,上清即為粗提的 DNA,可轉(zhuǎn)移至 0.2 mL 無(wú)菌離心管中,在-20℃下可長(zhǎng)期保存。

2,加樣、反應(yīng)

   1) 首次使用時(shí),分別加入 80 μL 超純水至陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照管中,充分溶解,-20℃存儲(chǔ)待用;
   2) 取出凍干粉試劑 EP 和 ST,按照需求分別剪取 n 個(gè)檢測(cè)試劑管(n=待檢測(cè)樣品數(shù)+1 管陽(yáng)性對(duì)照+1 管陰性對(duì)照),每管加入 18 μL 復(fù)溶液,充分溶解后待用;
   3) 向上述已加入復(fù)溶液的 n 個(gè)反應(yīng)管中分別加入待測(cè)樣品核酸、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各 2 μL,緊蓋后置于 PCR 儀中按設(shè)定的反應(yīng)程序進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng);
   4) PCR 反應(yīng)程序如下:

EPEC-STEC-EHEC多重PCR檢測(cè)試劑盒PCR反應(yīng)程序

3,結(jié)果判讀:反應(yīng)后每管中加入 4μL 6×Loading buffer,混勻,并取 8 μL 樣品經(jīng) 1.5%瓊脂糖凝膠電泳后在紫外儀下觀察,陰性對(duì)照僅有 uidA 條帶擴(kuò)增,陽(yáng)性對(duì)照中出現(xiàn)目標(biāo)條帶(參照?qǐng)D 1),PCR 試驗(yàn)結(jié)果成立。根據(jù)每個(gè)樣品對(duì)應(yīng)的凍干粉試劑EP 和 ST 反應(yīng)產(chǎn)生的目標(biāo)條帶種類,并查找該目標(biāo)條帶組合所對(duì)應(yīng)的致瀉大腸埃希氏菌類別(參照表 1),即為檢測(cè)結(jié)果。若陰陽(yáng)性對(duì)照管反應(yīng)結(jié)果不符,則本次檢測(cè)結(jié)果無(wú)效,應(yīng)重新檢測(cè)或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。

EPEC-STEC-EHEC多重PCR檢測(cè)試劑盒結(jié)果判讀

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